第三代PCR技術(shù)——數字PCR技術(shù)簡(jiǎn)介
? ? ? ?數字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個(gè)樣本分成幾到幾十萬(wàn)份，分配到不同的反應單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個(gè)反應單元中分別對目標分子進(jìn)行PCR擴增；擴增結束后，將有熒光信號的微滴判讀為1，沒(méi)有熒光信號的微滴判讀為0，最終根據泊松分布原理以及陽(yáng)性微滴的比例，計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數。
? ? ? ?數字PCR 是一種全新的絕對定量方式，與傳統定量 PCR 相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：
? ? ? ?絕對定量：不再依賴(lài)于 Ct 值和標準曲線(xiàn)，直接給出靶序列的起始濃度，實(shí)現真正意義上的絕對定量。
? ? ? ?更高靈敏度與特異性：數字PCR可實(shí)現萬(wàn)分之一稀有樣本的絕對定量，可用于極微量核酸樣本檢測、復雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。
? ? ? ?數字PCR在分子診斷領(lǐng)域將會(huì )發(fā)揮巨大的作用，數字 PCR 適用于腫瘤生物標志物研究、拷貝數變異分析、微生物檢測、轉基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等，并對遺傳病、癌癥、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段，具有廣泛的、不可替代的應用前景。
銳訊DropX-2000平臺特點(diǎn)
四通道檢測：FAM/HEX VIC/CY5//ROX 四色熒光檢測，提升數字PCR系統對多重PCR的包容性；
一體化芯片設計：可快速生成20,000~30,000個(gè)均勻微滴，液滴均一穩定、尺寸均一；全封閉體系，避免交叉污染。
數據質(zhì)控及回溯：支持圖像回溯及樣本一周內復測。
兼 容 染 料 法 和 探 針 法 及 其 他 類(lèi) 似 原 理 熒 光 方 法
銳訊數字PCR服務(wù)項目：
服務(wù)編號 | 服務(wù)內容 | 實(shí)驗耗時(shí) |
03.04.0002 | 樣本DNA抽提及模板制備 | 1-2個(gè)工作日 |
03.04.0003 | 樣本RNA抽提及模板制備 | 1-2個(gè)工作日 |
03.04.0004 | RNA樣本反轉錄 | 1-2個(gè)工作日 |
03.04.0005 | 引物探針設計 | 5-7個(gè)工作日 |
03.04.0006 | 引物探針合成 | 5-7個(gè)工作日 |
03.04.0007 | 數字PCR檢測 | 1-3個(gè)工作日 |
DNA樣品：純度OD260/280比值為1.6-1.8，濃度≥10 ng/μl，體積≥10μl。需要冰袋運輸。
RNA樣品：純度OD260/280比值為1.8-2.0，濃度≥20 ng/μl，體積≥20μl。需要干冰運輸。
暫不接受樣本：
全血、尿液、糞便等。
交付報告：
實(shí)驗報告：包括實(shí)驗方法、步驟、所用試劑、儀器型號及相關(guān)分析數據等。